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反相色譜法檢測食品中維生素E
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方案簡介

我們通常說的維生素E,也稱為生育酚,即指α-生育酚,為微黃綠色透明黏稠液體,易溶于有機(jī)溶劑,不溶于水,對(duì)熱穩(wěn)定,對(duì)氧極不穩(wěn)定,極易被氧化。維生素E,是一種性能優(yōu)良的抗氧劑和營養(yǎng)劑,同時(shí)具有生物活性高、食用安全的特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品、食品、化妝品等領(lǐng)域,成為近年來備受關(guān)注的熱點(diǎn)產(chǎn)品。

現(xiàn)采用太瑋科技GOWON®DUAL C18進(jìn)行檢測,文中檢測部分參照國家標(biāo)準(zhǔn) GB5009.82-2016食品中維生素E的測定方法,能有效把β-生育酚、γ-生育酚同分異構(gòu)體分離,分離度>1.5,結(jié)果能滿足檢測要求。


01


檢測項(xiàng)目/組分


α-生育酚(CAS號(hào):10191-41-0 )、β-生育酚(CAS號(hào):148-03-8)、γ-生育酚(CAS號(hào):54-28-4)、δ-生育酚(CAS號(hào):119-13-1)

02


檢測原理


試樣中的維生素E經(jīng)皂化(含淀粉先用淀粉酶酶解)、提取、凈化、濃縮后,反相液相色譜柱分離,紫外檢測器或熒光檢測器檢測,外標(biāo)法定量。

03


標(biāo)準(zhǔn)品制備


維生素E標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/mL):分別準(zhǔn)確稱取α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚各50.0mg,用無水乙醇溶解后,轉(zhuǎn)移入50mL容量瓶中,定容至刻度,此溶液濃度約為1.00mg/mL。準(zhǔn)確吸取維生素 E 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各1.00mL于同一50mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,此溶液中維生素 E各生育酚濃20μg/mL。

04


樣品制備


皂化:稱取2g~5g(精確至0.01g),樣品用約20mL溫水混勻,經(jīng)均質(zhì)處理的固體試樣轉(zhuǎn)入150mL平底燒瓶中,加入0.5g~1g淀粉酶,放入60 ℃水浴避光恒溫振蕩30min后,取出,向酶解液中加入1.0g抗壞血酸和0.1g 2,6-二叔丁基對(duì)甲酚,混勻,加入30mL 無水乙醇,10mL~20mL氫氧化鉀溶液,邊加邊振搖,混勻后于80℃恒溫水浴振蕩皂化30min,皂化后立即用冷水冷卻至室溫。

提取:將皂化液用 30 mL 水轉(zhuǎn)入 250 mL 的分液漏斗中,加入 50 mL 石油醚-乙醚混合液,振蕩萃取5min,將下層溶液轉(zhuǎn)移至另一250mL的分液漏斗中,加入50mL的混合醚液再次萃取,合并醚層。用約100mL水洗滌醚層,約需重復(fù)3次,直至將醚層洗至中性(可用 pH 試紙檢測下層溶液pH值),去除下層水相。

將洗滌后的醚層經(jīng)無水硫酸鈉(約3g)濾入250mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶或氮?dú)鉂饪s管中,用約15mL石油醚沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉2次,并入蒸發(fā)瓶內(nèi),并將其接在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或氣體濃縮儀上,于40℃水浴中減壓蒸餾或氣流濃縮,待瓶中醚液剩下約2mL 時(shí),取下蒸發(fā)瓶,立即用氮?dú)獯抵两伞S眉状挤执螌⒄舭l(fā)瓶中殘留物溶解并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中,定容至刻度。溶液過0.22μm 有機(jī)系濾膜后供高效液相色譜測定。

05


色譜條件


色譜柱:GOWON® DUAL-C18 2.7μm 150×4.6mm(PN:0738-1546)
保護(hù)柱:核殼通用保護(hù)柱(PN:G2030-K11)
流動(dòng)相:甲醇-水(92:8)
流速:1.0 mL/min
檢測器/波長:DAD / 294 nm
柱溫:20 ℃
進(jìn)樣量:10 μL

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色譜圖


供試品圖譜:

說明GOWON® DUAL-C18 2.7μm 150×4.6mmPN0738-1546)這款色譜柱能有效把β-生育酚、γ-生育酚同分異構(gòu)體分離,分離度>1.5,對(duì)比其他色譜柱AB是不能把β-生育酚、γ-生育酚這兩個(gè)同分異構(gòu)體分離的。流動(dòng)相有調(diào)整,能更便捷,快速檢定,符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

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